Thermo Pierce™ BCA 蛋白定量試劑盒 分子生物試劑
Thermo Pierce™ BCA 蛋白定量試劑盒
Pierce BCA 蛋白定量試劑盒是一種雙組分、高精度、兼容去垢劑的蛋白定量試劑,可準確測定蛋白濃度。對于蛋白研究中的常見樣品類型,Pierce BCA 試劑均可準確測定蛋白濃度。Pierce BCA 試劑可用于評估全細胞裂解物、親和柱分離組分和蛋白樣品純化的產(chǎn)量,還可在工業(yè)應用中用于蛋白污染的監(jiān)測。與大多數(shù)染料結合法相比,BCA蛋白定量法受蛋白質(zhì)氨基酸組成差異的影響更小,因此有更高的蛋白間定量一致性。
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BCA 蛋白定量試劑盒的特點包括:
•比色法測量—可以目測評估,也可使用標準分光光度計或酶標儀 (562 nm) 進行測量
• 高度一致性—與染料結合法 (Bradford) 相比,BCA定量法的蛋白間差異更小
• 兼容性強—在大多數(shù)離子型和非離子型去污劑的常見濃度下,性能不受影響
• 定量時間—30 分鐘孵育;與傳統(tǒng) Lowry 法相比,操作更簡單,且檢測速度快 4 倍
• 檢測范圍—BSA 的線性工作范圍為 20 至 2000 µg/mL
• 高靈敏度—使用增強方案,可檢測濃度低至 5 µg/mL 的樣品
測定工作原理
BCA 蛋白測定法是在堿性環(huán)境下,通過蛋白將 Cu2+ 還原為 Cu1+ ,再通過二辛可寧酸 (BCA) 來檢測亞銅陽離子 (Cu1+) 。步是銅與堿性環(huán)境中的蛋白質(zhì)螯合,形成淺藍色復合物,這一過程被稱為雙縮脲反應。在該反應(雙縮脲反應)中,由三個或更多氨基酸殘基的肽在含酒石酸鈉鉀的堿性環(huán)境中與銅離子形成有色螯合復合物。
在顯色反應的第二步中,BCA 與步形成的還原型(亞銅)陽離子發(fā)生反應。兩分子 BCA 與一個亞銅離子螯合,產(chǎn)生深紫色反應產(chǎn)物。BCA/銅復合物是水溶性的,在 562 nm 處具有強線性吸收,且吸收度隨蛋白質(zhì)濃度增加而升高。該復合物的靈敏度(檢測下限)大約是個反應中淡藍色的 100 倍。
反應很大程度上受到蛋白氨基酸序列中四個氨基酸殘基(半胱an酸、胱an酸、酪an酸和色an酸)的影響。然而,不同于考馬斯染料結合法,肽鏈也有助于顏色形成,因此可將不同蛋白間的測量差異降至zui低
Thermo Pierce™ BCA 蛋白定量試劑盒